Project Description
MagiK DNA İZOLASYON KİTİ
TEKNOLOJİ ÖZETİ
Canlı ve cansız bitki kısımlarından çekirdek ve sitoplazmada bulunan DNA moleküllerinin daha ucuz, çok sayıdaki yöntemden çok daha kısa bir sürede elde edilmesine yönelik bir teknolojidir. Genomik dna’nın doğrudan çok sayıda canlı bitki materyalinden (polen, sepal, petal, sap, sapçık, kök, kökçük, ovül, meyve kabuğu ve plasenta, tüm çiçek, tohum, yaprak, kaliks, epidermal hücreler) ve kurutulmuş bazı bitki aksamları ile un ve pirincin de bulunduğu cansız bitki materyallerinden elde edilmesini sağlar.
Bunlara ek olarak DNA Bağlanma Kolonu (DBK) oluşturma, kullanılmış DBK yeniden oluşturulması, DNA’nın agaroz jelden pürifikasyonu ve başka yöntemlerle elde edilmiş DNA’nın pürifikasyonunu sağlamaktadır.
AVANTAJLARI
- Çok sayıda bitki türü ve kısımlarından DNA izolasyonuna imkân sağlamaktadır.
- Alternatiflerine göre kısa bir sürede DNA izole edebilmektedir. Örneğin 24 bitki tohum örneğinden yaklaşık bir saatlik bir sürede DNA izole edilebilmektedir.
- Üretim maliyeti düşüktür.
- Yaygın kullanılan silika tabanlı DNA izolasyon kitlerine göre eşdeğer veya yüksek verime sahiptir.
- Araştırıcıların sağlıklarına olumsuz etki edecek kanserojenik ve mutagenik ajanlar içermemektedir.
- Buluştaki solüsyonlar ile yöntem piyasadaki bütün silika tabanlı DNA Bağlanma Kolonları ile uyumlu olup arzu edildiğinde doğrudan bu kolonlarla kullanılabilmektedir.
- Daha az kullan – at malzeme kullanılmakta ve DNA Bağlanma Kolonu ve diğer plastik malzemelerin yeniden kullanım olanağı sunmaktadır.
YÖNTEM
Filtre kağıtlarının pens ve yükleme çubuğu ile tüpün içerisine yerleştirilmesi ve üzerine 15-67 mg silika eklenmesi,
Silika yüzeyi dengelendikten sonra üzerine en az 1 adet filtre kağıdının üzerine O-halkanın yükleme çubuğu ile bastırılması,
Kolona 0,25-0,75 mL kolon denge solüsyonunun (KDS) eklenmesi,
Karışımın 1-3 saat boyunca 22-26 C’de bekletilmesi,
Karışımın 6000-12000xg hızında 1-2 dakika boyunca santrifüj işlemine tabi tutulması işlem adımlarını içermektedir.
Doku lezyon çözeltileri hazırlanmasında, Tris, EDTA, SDS, SLS, PVPP ile sodyum azid (NaN3) kullanılmıştır.
Lezyon çözeltisi eşliğinde proteinaz K ile muamele edilerek proteinler parçalanırken hücresel RNA molekülleri (rRNA, mRNA, tRNA ve diğer RNA tipleri) RNaz enzimiyle yıkılmaktadır.
DNA izolasyon kitinde kullanılan DNA solüsyonlarının hazırlanması ile DNA izolasyonu başlatılabilecektir. DNA izolasyonu;
A. Doku parçalanması, hücrelerin açığa çıkartılması ve hücre lezyonu,
B. DNA moleküllerinin açığa çıkarılması,
C. DNA moleküllerinin silika partiküllerine bağlanması,
D. DNA molekülünün yıkanması ve silikadan ayrıştırılması olmak üzere dört aşamadan oluşmaktadır.
PROSEDÜR ADIMLARI
- İzolasyon Kolonunun Oluşturulması – Hazırlama Süresi 4 saat
- Mevcut Kolonun ve piyasada bulunanların yeniden Kullanım için Hazırlanması – Hazırlama Süresi 48 Saat
- DNA’nın Silika Kolona Bağlanması 2- 3 saat
- Lizis Solüsyonunun Hazırlanması ve Bitki Örneklerinin Eklenmesi 1 -2 saat
- Yıkama ve Kolondan DNA’nın ayrıştırılması 1- 2 saat
- Solüsyonların Hazırlanmasından sonra kullanıcı ;
DNA Dokusunun Parçalanma ve Lizis Süresi max:30 dk. ;
Kolondan Ayrılmanın Gerçekleşme Süresi Max: 40 dk.
Elde edilen DNA Miktarı yaklaşık 0,5 – 1 µg
KULLANIM İÇİN GEREKLİ MATERYALLER
Kit içinde verilen tüpleri kullanmama kararı verilirse
1,5 ml veya 2 ml’lik mikrosantrifüj
• tüpleri (lizis adımları için) ve 1,5 ml’lik
mikrosantrifüj tüpleri (elüsyon adımları için)
• Santirfüj
• Filtre Kağıdı
• Otoklav
• Kloroform
• İsopropanal
KULLANIM ALANLARI
Buluşun Moleküler Biyoloji, Moleküler Genetik, Epigenetik, Biyoteknoloji, Moleküler Bitki Islahı, Gıda, Tarım ve Çevre Güvenliği, tarım ürünleri ithalat ve ihracat sahalarında kullanım potansiyeli mevcuttur.
Ürünün in vitro diagnostik (IVD) amaçlara yönelik molekülerbiyoloji teknikleri konusunda eğitimli teknisyenler ve hekimler gibi profesyonel kullanıcılar tarafından kullanılması amaçlanmıştır.
Ürün manuel numune hazırlama amaçları için tasarlanmıştır.
FİKRİ MÜLKİYET HAKKI
